流式细胞术广泛用于分析细胞表面和细胞内分子的表达、鉴定并确定异质细胞群中的不同细胞类型、评估分离亚群的纯度以及分析细胞大小和容积。这种技术可同时分析单个细胞的多个参数，主要用于测定荧光标记的抗体检测蛋白产生的荧光强度，或结合了特定细胞分子的配体，如碘化丙啶与 DNA 的结合。其染色过程包括从细胞培养物或组织样品制备单细胞悬液。然后将获得的细胞培养在包含未标记或荧光标记抗体的试管或多孔板中，再用流式细胞仪分析。

      经荧光染色或标记的单细胞悬液放入样品管中，被高压压入流动室内。流动室内充满鞘液，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷口喷出。在流动室的喷口上配有一个超高频的压电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正、负不同的电荷，当液滴流经过带有几千伏的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，没有充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。流式细胞系统包括：液流系统（Fluidics System),光学系统(Optics System),电子系统(Electronics System)。

流式细胞术主要应用于细胞功能检测以及免疫细胞亚群检测，细胞功能检测主要包括：(1)细胞凋亡 ,(2)细胞周期, (3)活性氧,(4)细胞活性,(5)线粒体膜电位,(6)细胞增殖Brdu等。一些常见的免疫细胞亚群表面Marker如下：

流式细胞检测注意事项：

(1)注意流式抗体选择及配色，需要考虑荧光色素的亮度和稳定性，一般弱表达抗原分配强荧光素，常见荧光色素强弱如下。

(2)一些常见Marker生物学特性和表达 ①容易区分阴性阳性细胞群，如CD3,CD4,CD19 ②容易鉴定，较高水平表达如CD27,CD28,CD45RA,CD45RO ③低水平表达但关键的Marker如CD25,STAT5,Foxp3等。

(3)设定抗体浓度梯度进行预实验，摸索最佳浓度。

结果示例：某小鼠模型肿瘤微环境免疫亚群分析。