基因组范围的CRISPR 敲除（GeCKO）文库能够在人细胞中快速产生功能缺失的突变体并且筛选所期望的表型。GeCKO文库是gRNA的混合文库，可以在人基因组内敲除任何表达基因及非表达的基因，如miRNA基因。改进后的GeCKO v2.0文库含有非靶向gRNA作为对照，与此同时用来转导的慢病毒载体也同步进行了升级，以便更高效的富集病毒和提升病毒在原代细胞的转染效率。GeCKO文库已经被广泛使用于原代细胞，干细胞，癌细胞及各种稳定细胞系。 GeCKO文库允许客户在不同的条件下鉴定任何细胞功能必须的基因，筛选哪个基因的缺失使癌细胞具有耐药性。要获取更多GeCKO文库设计、构建信息，请参考张峰实验室发表的文献。1Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells. Ophir Shalem et al. Science 343, 84 (2014); DOI: 10.1126/science.1247005.2 Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening   Julia Joung et al. Nature Protocols, 828, 12 (2017); DOI:10.1038/nprot.2017.016.

 GeCKO v2.0文库使用all-in-one的lentiCRISPR v2慢病毒载体，其具有比原来的lentiCRISPR载体高10倍的病毒滴度。GeCKO文库一共靶向19050个基因，一共含有123,411个质粒。针对人类基因组的每个基因，该文库的设计包含：6条单链gRNA（sgRNA）以及针对每个miRNA的4条sgRNA，及1000条非靶向性的对照sgRNAs。这些gRNA分布在每个基因超过3-4个组成型表达的外显子上，以此将脱靶效应降至很低。其中骨架质粒结构如下：

pLentiCRISPR v2质粒图谱

如何使用GeCKO文库

GeCKO文库是CRISPR gRNA的混合文库，可以在人的基因组内敲除任何基因及非表达的基因。每条gRNA克隆到优化过的慢病毒载体中以实现高效率地转染原代细胞或培养细胞。GeCKO文库应以较低的MOI值转导细胞，以保证每个细胞进入不超过1条gRNA。在CRISPR/Cas9正向筛选中，可以用来筛选哪些基因的敲除引起细胞对药物、毒素、病原体等产生耐受性。要获取关于GeCKO文库筛选更多应用，请参考 Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening. Julia Joung et al. Nature Protocols, 828, 12 (2017);DOI:10.1038/nprot.2017.016

CRISPR/Cas9 基因组编辑相关服务

1> CRISPR gRNA质粒构建服务;  2> CRISPR基因组编辑服务