免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation，Co-IP)技术是以抗原、抗体间的特异性免疫反应为基础，研究蛋白质间相互作用的经典方法。与其它研究蛋白质相互作用的方法相比，免疫共沉淀是在生理条件下检测蛋白质间相互作用，因此，不仅可以检测到体内形成的天然复合体，而且可排除过表达靶蛋白所带来的假阳性；由于内源性的靶蛋白是完全加工、修饰成熟的蛋白质，因此，依赖于修饰的蛋白质间相互作用也可以被检测到。

实验原理      

免疫共沉淀技术原理是以细胞内源性靶蛋白(protein X)为诱饵，将protein X的抗体与细胞总蛋白进行共孵育，促进免疫复合物的形成；随后加入能够与抗体Fc段结合的protein A/G(预先结合固化在琼脂糖微珠上)，这样在protein X所在的环境中与其有相互作用的蛋白(protein Y)会被一起沉淀下来，形成"结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-protein A/G微珠"复合物，纯化该复合物后凝胶电泳分离蛋白，应用Western blot 或者质谱技术鉴定靶蛋白的结合蛋白。

服务流程

服务承诺：

1. (2)根据总蛋白定量的结果，微调各个样本间浓度差异，高温变性，加入loading buffer，上样跑胶，以及转膜显色等步骤。
2. (3)利用软件对所得胶片进行扫描，用相对定量方法进行定量分析时，要对管家蛋白等参比蛋白进行同样操作，用所得到的值进行蛋白量的校正，(4)最后求得目的蛋白的相对表达量。
3. (5)提供实验报告：包括详细的实验方法及western blot结果的相关图表。
4. (6)本公司保证检测结果准确、客观、可信，但不能确保一定要得到某特定结果。

客户提供:

1. (1)客户须在实验开始前确保其细胞或组织中有目的蛋白的表达，并提供目的蛋白的相关信息（蛋白名称、大小等信息），尽可能详细的背景资料，包括蛋白的种属、大小、参考文献等。
2. (2)诱饵蛋白及目的蛋白的表达质粒，需测序验证，提供测序峰图文件。
3. (3)如无需转染或转化的，则需提供含有诱饵蛋白及目标蛋白的裂解液5mL以上，如果为原核表达，则需要求蛋白务必为上清表达。
4. (4)客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。
5. (5)如需使用诱饵蛋白及目标蛋白的特异性抗体检测，则需提供至少20ul以上特异性抗体。依据实验设计提供对应的诱饵Western blot实验结果及免疫共沉淀WB结果。保留原始的实验曝光胶片以及免疫共沉淀实验报告。
6. (6)新鲜样品（组织为100-150 mg/样，细胞>10^7个/样），若为冻存样品，请于-70 ℃以下保存并自备液氮以便运输。一抗，标明来源和稀释度，也可让我司代买。
7. (7)Co-IP所需要的目的蛋白的一抗，可自行提供，或在本公司购买相应指标。

结果展示：

                                                                                               利用免疫共沉淀检测细胞内源蛋白X与蛋白Y的相互作用。

常见问题及可能原因